정량적 PCR

정량적 PCR (QPCR)은 DNA 폴리머 라제 연쇄 반응 (PCR) 기술을 사용하여 표적 DNA의 수를 정량화하는 방법입니다. 이 방법은 의료 진단, 유전자 발현 연구, 유전자 분석 및 바이러스 적정에서 넓은 적용 가치를 갖는다.

1. 정의와 원리

정량적 PCR은 샘플의 원래 템플릿 수를 추정하도록 설계되었습니다. 그것의 원리는 PCR 증폭의 규칙 성을 기반으로합니다. PCR 증폭의 지수 기간 동안, 원래 템플릿의 수는 증폭 된 생성물의 양을 측정하여 역전된다. 구체적으로, 증폭 된 생성물 N 및 PCR 증폭의 효율 e가 알려진 경우, 원래 주형 번호의 값은 공식을 사용하여 계산 될 수있다.

실시간 형광 정량적 PCR (FQ-PCR)에서, 형광 화학 물질도 도입되고, 형광 신호 강도는 PCR 반응이 진행됨에 따라 동일한 비율로 증가한다. 형광 임계 값을 설정하고 사이클 임계 값 (CT 값)을 측정함으로써, 즉, 형광 신호에 의해 경험되는 사이클 수가 설정 임계 값에 도달 할 때, 시작 DNA 템플릿의 수를 더 정확하게 계산할 수있다.

2. 실험 단계

정량적 PCR 실험에는 일반적으로 다음의 주요 단계가 포함됩니다.

1. 제조 시약 : 주형 DNA, 프라이머 (전방 프라이머 및 리버스 프라이머), DNA 폴리머 라제, DNTP (4 개의 데 옥시 뉴클레오티드), 완충액 및 MGCL2 등 포함

2. 반응 시스템 구성 : 템플릿 DNA, 프라이머, DNA 폴리머 라제, DNTP, 완충액 및 MGCL2를 혼합하여 PCR 반응 용액을 얻습니다.

3. PCR 증폭 조건 최적화 : 온도 조건 및 PCR 사이클 수를 조정하여 최적 조건 하에서 PCR 반응이 수행되도록합니다.

4. PCR 증폭 : 세 가지 단계, 즉 변성, 어닐링 및 확장, 다중주기를 통해 표적 DNA의 지수 증폭을 달성합니다.

5. PCR 생성물의 검출 : 겔 전기 영동, 형광 정량적 PCR 또는 실시간 정량적 PCR에 의해 수행 될 수있다. 실시간 정량적 PCR은 PCR 반응 진행을 실시간으로 모니터링하고 PCR 생성물의 양을 정확하게 측정하는 능력으로 인기가 있습니다.

3. 기술적 특성

1. 높은 감도 : 정량적 PCR은 마이크로 샘플의 분석에 적합한 매우 낮은 농도의 DNA 템플릿을 검출 할 수 있습니다.

2. 높은 특이성 : 특정 프라이머의 설계를 통해, PCR 반응은 표적 DNA 서열을 증폭시킬 수있다.

3. 정량적 정확도 : 형광 정량화 기술과 결합, 시작 DNA 템플릿의 수의 정확한 정량화를 달성 할 수 있습니다.

4. 널리 사용 : 의학적 진단, 유전자 발현 연구, 유전자 분석 및 바이러스 적정에 중요한 적용이 있습니다.

4. 응용 프로그램 전망

생명 공학의 지속적인 개발로 정량적 PCR은 과학 연구 및 임상 실습에서 더 광범위한 응용 전망을 가지고 있습니다. 특히 바이러스 적정 측면에서, QPCR 기술은 오염 및 반복성의 빠르고 민감한 낮은 확률로 인해 많은 바이러스 탐지의 첫 번째 선택이되었습니다. 또한, 정량적 PCR은 또한 유전자 발현 연구, 유전자 분석 등의 분야에서 대체 할 수없는 역할을한다.

상기로부터, 정량적 PCR은 중요한 분자 생물학 기술이며, 많은 분야에서의 적용 전망이 기대할 가치가 있음을 알 수있다. 기술의 지속적인 발전과 개선으로, 우리는 정량적 PCR이 미래의 과학 연구 및 임상 작업에서 더 중요한 역할을 할 것이라고 생각합니다.