단백질 정제 워크 스테이션의 작동 방법

단백질 정제 워크 스테이션의 작동 방법은 종종 복잡한 혼합물로부터 표적 단백질의 효율적인 분리를 보장하기위한 몇 가지 상세하고 중요한 단계를 포함한다. 다음은 참조를위한 일반적인 작동 방법입니다. 특정 작동 세부 사항은 장비 모델, 정화 방법 및 실험 요구 사항에 따라 다를 수 있습니다.

1. 준비

1. 샘플 준비 :

1> 세포 용 해물, 조직 추출물 또는 발효 국물 등과 같은 표적 단백질을 함유하는 샘플을 수집하고 처리합니다.

2> 표적 단백질의 특성에 따라 핵산 제거, pH 조정, 불순물 제거 등과 같은 전처리가 필요할 수 있습니다.

2. 장비 검사 :

1> 단백질 정제 워크 스테이션의 모든 구성 요소가 손상되지 않고 연결이 정확하며 전원 공급 장치가 안정적인지 확인하십시오.

2> 정제 배지 (크로마토 그래피 컬럼, 친 화성 크로마토 그래피 필러 등)가 올바르게 설치되었으며 작동 상태에 있는지 확인하십시오.

3. 버퍼 준비 :

1> 실험 요구 사항에 따라 평형 완충액, 용리 완충액 등을 포함하여 다른 농도의 버퍼를 준비하십시오.

2> 완충액의 조성, pH 및 이온 강도가 표적 단백질의 특성과 일치하는지 확인하십시오.

2. 샘플 로딩

1. 샘플 여과 :

1> 샘플에서 불순물과 입자를 제거하기 위해 적절한 필터 (예 : 0.22μm 또는 0.45μm 필터 멤브레인)를 사용하여 샘플에 명확하고 현탁 된 물질이 없도록하십시오.

2. 샘플 로딩 작업 :

1> 로딩 시스템을 통해 처리 된 샘플을 정제 워크 스테이션에 추가하십시오.

2> 장비 요구 사항에 따라 유량, 압력 및 샘플 로딩과 같은 매개 변수를 조정하십시오.

3. 정제 과정

1. 균형 :

1> 평형 완충제로 정제 배지를 헹구어 배지에서 불순물 및 잔류 물을 제거하고 배지가 안정적인 상태에 도달하도록합니다.

2> 시스템의 안정적인 작동을 보장하기 위해 평형 과정에서 유속 및 압력의 변화에주의하십시오.

2. 흡착 :

1> 평형 후, 표적 단백질은 정제 배지에서 리간드 (예 : 항체, 금속 이온 등)에 결합하여 복합체를 형성한다.

2> 표적 단백질 및 리간드의 결합 특성에 따라 적절한 흡착 조건 (예 : 온도, pH, 이온 강도 등)을 선택하십시오.

3. 용리함 :

1> 표적 단백질을 정제 배지로부터 분리하고 용리 완충액의 농도를 점차적으로 증가 시키거나 다른 조건 (pH, 이온 강도 등)을 변화시킴으로써 용리액으로 흐릅니다.

2> 용리 과정에서 용리 조건을 제 시간에 조정할 수 있도록 용리 곡선의 변화에 ​​세심한주의를 기울이십시오.

4. 수집 및 탐지

1. 수집 :

1> 수집기를 사용하여 용리액에서 표적 단백질을 파악하십시오.

2> 실험 요구 사항에 따라 농도, 액체 변화 등과 같은 수집 액체의 추가 처리가 필요할 수 있습니다.

2. 테스트 :

1> 표적 단백질의 순도와 농도를 감지하기 위해 적절한 방법을 사용하십시오. 일반적으로 사용되는 방법은 SDS-PAGE 겔 전기 영동, 쿠마시 밝은 청색 염색, 자외선 분광 광도계 등을 포함합니다.

2> 정제 효과를 평가하기 위해 결과 데이터를 기록하고 분석하십시오.

5. 후속 처리

1. 데이터 처리 :

1> 감지 결과에 따라 정제 효과를 분석하고 정제 과정을 최적화하기 위해 실험 조건을 조정하십시오.

2> 실험 데이터를 구성하고 실험 보고서를 작성하십시오.

2. 장비 청소 및 유지 보수 :

1> 정제 스테이션의 정제 후, 잔류 물과 먼지를 제거하기 위해 모든 성분을 정화하고 청소해야합니다.

2> 장기적이고 안정적인 작동을 보장하기 위해 장비를 정기적으로 유지 관리하고 유지 관리합니다.

6. 주목할만한 것들

1. 전체 정제 과정에서 실험 담당자 및 장비의 안전을 보장하기 위해 작동 절차 및 안전 사양을 엄격하게 준수해야합니다.

2. 정제 매체의 선택 및 정제 조건의 설정은 표적 단백질의 특성 및 실험 요구에 따라 합리적으로 설계되어야한다.

3. 실험 중에 다양한 매개 변수의 변화를 관찰하고 기록하여 문제를 적시에 발견하고 해결하는 데주의를 기울이십시오.

다양한 브랜드 및 모델의 단백질 정제 워크 스테이션에는 운영 차이가있을 수 있으므로 실제 운영에서 특정 장비의 운영 매뉴얼을 참조하거나 장비 공급 업체에 문의하여 자세한 작업 지침을 보려면 장비 공급 업체에 문의해야합니다.