실시간 정량적 PCR

실시간 정량적 PCR, 전체 이름 실시간 정량적 PCR (QPCR이라고하는 실시간 정량적 PCR)은 분자 생물학 실험 기술입니다. 그것은 PCR 증폭 기술과 형광 검출 기술을 결합하여 PCR 증폭 동안 특정 DNA 또는 RNA 서열의 카피 수를 모니터링하고 정량화합니다.

1. 실시간 정량적 PCR의 장점과 단점

이점:

1. 높은 감도 및 특이성 : QPCR은 매우 낮은 농도의 핵산 분자를 검출하고 표적 서열을 정확하게 식별 할 수 있습니다. 이것은 바이러스 부하를 탐지하는 것과 같은 임상 진단에서 특히 중요합니다.

2. 강력한 정량적 능력 : 형광 신호의 축적을 통해 반응의 진행 상황을 실시간으로 모니터링하여 절대 또는 상대적 정량화를 달성 할 수 있습니다.

3. 빠르고 효율적인 : 전통적인 PCR과 비교하여 QPCR은 보통 1 시간 이내에 단시간에 큰 샘플의 검출을 완료 할 수 있습니다.

4. 데이터 직관적 : 실시간 곡선 차트를 통해 연구원들은 결과를 쉽게 분석하고 해석 할 수있는 증폭 곡선을 직관적으로 관찰 할 수 있습니다.

결점:

1. 높은 비용 : QPCR 기기 및 형광 염료는 비싸고 운영 비용이 더 높습니다.

2. 높은 기술 요구 사항 : 운영자는 실험 오류를 피하기 위해 특정 전문 지식과 기술이 필요합니다.

3. 오염에 적합 : 민감도가 높기 때문에 샘플 오염은 부정확 한 결과로 이어질 수 있으므로 엄격한 실험 조건이 필요합니다.

2. 실시간 정량적 PCR의 장비 조성

실시간 정량적 PCR 시스템은 주로 다음 부분으로 구성됩니다.

1. QPCR 기기 : 이것은 PCR 반응 동안 형광 신호 변화를 모니터링하는 데 사용되는 형광 검출 시스템이 장착 된 핵심 장비입니다.

2. 열 사이클러 : DNA의 변성, 어닐링 및 연장을 달성하기 위해 반응 시스템의 온도 변화를 제어합니다.

3. 광학 검출 시스템 : 반응 튜브의 형광 신호를 감지하고 분석을 위해 전기 신호로 변환하는 데 사용됩니다.

4. 소프트웨어 : 데이터 수집, 처리 및 분석에 사용되며 증폭 곡선 및 표준 곡선과 같은 결과를 생성합니다.

3. 실시간 정량적 PCR의 작동 방법

작업 방법에는 주로 다음 단계가 포함됩니다.

1. 샘플 준비 : 샘플에서 DNA 또는 RNA를 추출하고 역전사 효소를 통해 RNA를 cDNA로 변환합니다.

2. 반응 시스템 준비 : 프라이머, 프로브 또는 염료, DNTP, TAQ 효소, 완충제 및 주형 핵산과 같은 성분의 혼합 포함.

3. 반응 조건 설정 : 사전 연합, 주기적 변성, 어닐링 및 연장 단계를 포함한 특정 실험 요구에 따라 적절한 PCR 반응 절차를 설정합니다.

4. 데이터 수집 및 분석 : 각주기가 끝나면 기기는 자동으로 형광 신호를 기록하고 소프트웨어를 통해 데이터 분석을 수행하여 샘플의 시작 핵산량을 계산합니다.

과학 연구 및 임상 진단에서 실시간 정량적 PCR에는 광범위한 응용 분야가 있습니다. 특정 비용과 기술적 장벽에도 불구하고 비교할 수없는 정확도와 효율성은 대체 할 수없는 도구입니다. 과학 연구원과 의료진의 경우이 기술의 운영 절차 및 장비 사용 방법을 마스터하는 것이 실험 효율성과 데이터 정확도를 향상시키는 열쇠입니다.