프로테오믹스 샘플 전처리

Proteomics 샘플 전처리는 Proteomics Research의 주요 링크 일뿐 만 아니라 핵심 위치는 대체 할 수 없습니다. 후속 실험 데이터의 정확성과 실험 결론의 견고성을 직접 결정합니다. 다음은 단백질 샘플 전처리의 핵심 단계에 대한 자세한 설명입니다.

1. 샘플 수집

프로테오믹스 연구에서 샘플 수집은 중요한 첫 단계입니다. 샘플의 대표성과 일관성을 보장하려면 다음과 같은 원칙을 따라야합니다.

1. 빠른 동결 : 단백질 분해 및 오염을 피하기 위해 액체 질소 또는 -80 ℃ 냉장고와 같은 가능한 빨리 저온 환경에 샘플을 넣으십시오.

2. 균일 성과 일관성 : 샘플을 수집 할 때 실험 결과의 신뢰성을 보장하기 위해 샘플의 균일 성과 일관성을 보장해야합니다.

3. 표적 수집 : 다른 유형의 샘플 (예 : 동물 조직, 미생물, 세포 등)의 경우, 다른 수집 방법이 특성에 따라 선택되어야합니다. 예를 들어, 인간에서 외과 적으로 제거 된 조직의 경우, PBS (포스페이트 완충 식염수 용액)를 사용하여 혈액을 청소하고 제거 할 수 있습니다. 생쥐, 쥐 및 다른 동물의 조직 샘플의 경우 관류를 사용하여 혈액을 제거 할 수 있습니다.

2. 깨진 샘플

샘플 파괴는 단백질 추출 전에 필요한 단계이며, 그 목적은 세포에서 단백질을 완전히 방출하는 것입니다. 샘플 분쇄의 주요 방법에는 기계적 조각화, 온도 차이 방법 및 압력 차이 방법이 포함됩니다. 그중에서도, 기계적 단편화는 액체 질소 연삭, 균질화 및 비만 방법을 포함하고; 온도 차이 방법은 세포벽을 함유하는 샘플, 예컨대 박테리아; 압력 차이 방법은 조직 샘플에 적용 할 수 있습니다. 분쇄 과정에서, 단백질 분해를 방지하기 위해 저온 환경을 유지하고 프로테아제 억제제를 추가해야한다.

III. 단백질 추출

단백질 추출은 샘플로부터 단백질을 분리하는 것을 목표로 단백질 학 연구의 두 번째 단계이다. 고품질 단백질 추출물을 얻으려면 다음과 같은 원리를 따라야합니다.

1. 적절한 완충액 및 용매를 선택하십시오 : 단백질을 최대한 많이 녹여 넣으십시오.

2. 불순물 제거 : 추출 과정에서 원심 분리 및 여과를 통한 불순물 제거와 같은 비특이적 단백질의 오염을 피하십시오.

3. 정량 및 순도 검출 : 추출 된 단백질은 후속 실험의 정확성을 보장하기 위해 정량적 및 순도 검출이어야합니다.

IV. 단백질 분리

단백질 분리는 그들의 특성에 따라 단백질을 분리하고 정제하는 것을 목표로 단백질 학 연구의 세 번째 단계입니다. 일반적으로 사용되는 단백질 분리 방법은 겔 전기 영동, 크로마토 그래피 등을 포함합니다. 분리 과정에서 다음 지점은 다음에주의를 기울여야합니다.

1. 적절한 분리 방법을 선택하십시오. 실험 목적에 따라 적절한 분리 방법을 선택하십시오 (예 : 대규모 프로테오믹스 연구의 경우보다 고급 분리 기술이 필요할 수 있습니다.

2. 일정한 온도와 적절한 pH를 유지하십시오 : 실험 결과의 안정성을 보장합니다.

3. 품질 관리 탐지 : 분리 된 단백질 밴드 또는 피크의 경우, 후속 식별의 정확성을 보장하기 위해 품질 관리 탐지가 필요합니다.

V. 단백질 식별

단백질 식별은 단백질의 유형, 구조 및 기능을 결정하기 위해 프로테오믹스 연구의 최종 단계입니다. 일반적으로 사용되는 단백질 식별 방법에는 질량 분석법 기술 및 항체 검출이 포함됩니다. 식별 과정에서 다음 지점은 다음에주의를 기울여야합니다.

1. 적절한 식별 방법을 선택하십시오. 예를 들어, 대규모 단백질 연구의 경우보다 효율적이고 민감한 질량 분석법이 필요할 수 있습니다.

2. 일정한 온도와 적절한 pH를 유지하십시오 : 실험 결과의 안정성을 보장합니다.

3. 검증 및 반복 실험 : 확인 된 단백질의 경우 결과의 신뢰성과 정확성을 보장하기 위해 검증 및 반복 실험이 필요합니다.

6. 주목할만한 것들

1. 반복적 인 동결 시동을 피하십시오 : 단백질은 차갑고 가열되어 단백질 분해로 이어질 것이므로 실험 중에 반복적 인 동결 시동을 피해야합니다.

2. 저온 환경 유지 : 전체 전처리 과정에서 단백질 분해를 방지하기 위해 저온 환경을 유지해야합니다.

3. 오염 방지 : 수술 중에는 깨끗한 장갑, 나이프 및 유리 판을 사용하는 것과 같은 오염을 피해야합니다.

프로테오믹스 샘플 전처리는 복잡하고 정교한 포괄적 인 과정입니다. 실험 결과의 정확성, 신뢰성 및 안정성을 보장하기 위해 일련의 과학적 원리와 미세 작동 방법을 엄격하게 준수해야합니다.