단백질 정제 방법

생화학 및 분자 생물학 분야의 핵심 기술로서 단백질 정제는 복잡한 생물학적 혼합물로부터 고순도 표적 단백질을 정확하게 추출하는 것을 목표로한다. 이 과정에는 절묘한 기술이 필요할뿐만 아니라 표적 단백질의 고유 한 특성, 정제의 특정 목표 및 실험 환경의 신중한 고려에 기초하여 가장 적합한 정제 방법을 신중하게 선택해야합니다. 이 기사는 다른 상황에 적합한 몇 가지 단백질 정제 방법을 소개합니다.

1. 솔루션 분리 방법

1> 원리 : 분리를 위해 다른 용매에서 단백질의 용해도 차이를 사용하십시오.

2> 일반적으로 사용되는 용매 : 소금 용액, 유기 용매 등

3> 특징 : 기본적이고 단순하지만 일반적으로 예비 분리 단계로 사용됩니다.

2. 이온 교환 크로마토 그래피

1> 원리 : 단백질과 이온 교환 수지 사이의 전하 상호 작용을 사용하여 분리하십시오. 수지의 고정화 된 이온은 선택적으로 흡착되고 방출 된 단백질.

2> 유형 : 양이온 교환 및 음이온 교환.

3> 특징 : 정제 중에 가역성, 강한 조작 및 샘플 농도의 특성이 있습니다. 그것은 종종 정제 실험에 사용되며 종종 다른 방법과 함께 사용됩니다.

3. 겔 여과 크로마토 그래피 (배제 크로마토 그래피 또는 분자 체라고도 함)

1> 원리 : 단백질 분자의 크기에 따라 분리됩니다. 겔 크로마토 그래피 컬럼을 통과 할 때 상이한 확산 능력으로 인해 상이한 크기의 단백질이 분리된다.

2> 특징 : 작동 조건은 경미하며 유기 용매가 필요하지 않으며, 이는 중합체 물질에 대한 분리 효과가 양호합니다. 그러나 전하 밀도가 높은 단백질을 정제하는 것은 적합하지 않습니다.

4. 친 화성 크로마토 그래피

1> 원리 : 정제는 단백질과 친 화성 매트릭스 사이의 특정 상호 작용을 사용하여 수행됩니다. 예를 들어, 특이 적 항체는 관심있는 단백질에 결합하는데 사용 된 다음 항체 컬럼을 통해 분리 및 정제된다.

2> 특징 : 높은 선택성, 고순도, 빠른, 농축, 자주 재조합 단백질의 예비 정제에 사용됩니다.

5. 전기 영동 정제

1> 원리 : 전기 힘 및 단백질 전하를 사용한 분리 방법.

2> 유형 : 겔 전기 영동 (예 : 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동 및 SDS-PAGE) 및 등전점 전기 초점 등을 포함합니다.

3> 특징 : 단백질의 크기, 전하 및 모양에 따라 분리되며 특정 조건 하에서 단백질 분리에 적합합니다.

6. 액체 크로마토 그래피 정제

1> 원리 : 크로마토 그래피 컬럼에서 단백질의 분할 계수에 기초하여 분리.

2> 유형 : 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC), 크기 배제 크로마토 그래피 및 역상 크로마토 그래피 포함.

3> 특징 : 고해상도, 고 감도, 복잡한 샘플에서 단백질 정제에 적합합니다.

7. 소분자 결합 정제

1> 원리 : 표적 단백질에 결합하는 소분자 (예 : 효소 기질, 억제제 또는 리간드)를 사용하여 표적 단백질을 정제한다.

2> 특징 : 특정 단백질은 선택적으로 결합하고 정제 될 수 있습니다.

8. 다른 방법

1> 암모늄 황산염 침전 방법 : 종종 원유 분리 단계에서 사용되며, 표적 단백질을 RNA, DNA 등과 같은 다른 세포 성분과 분리합니다.

2> 소수성 크로마토 그래피 : 단백질과 크로마토 그래피 배지 사이의 소수성 상호 작용을 사용하여 분리되며 소수성 특성을 가진 단백질에 적합합니다.

요약

단백질 정제는 의심 할 여지없이 복잡하지만 중요한 작업입니다. 종종 층별로 복잡한 혼합물로부터 더 높은 순도 표적 단백질을 점차적으로 추출하기 위해 다중 정제 기술을 영리하게 연결해야한다. 이 과정에는 표적 단백질의 고유 한 특성 및 정제 요구 사항에 대한 심층적 인 통찰력이 필요할뿐만 아니라 실험 조건의 실제 상황과 포괄적이고 신중한 고려 사항과 긴밀한 통합이 필요합니다. 과학과 기술의 빠른 발전으로 비가 후에 새로운 단백질 정제 방법이 버섯처럼 등장하여 과학 연구자들에게보다 다양하고 효율적인 선택을 제공하여 생화학 및 분자 생물학 분야의 진보와 발전을 크게 촉진한다는 점을 언급 할 가치가 있습니다.