DNA 정제 방법

DNA 정제는 생물학 및 분자 생물학 분야의 핵심 단계이며, 복잡한 샘플에서 다양한 불순물을 정확하게 분리하고 제거하여 고급 고품질 DNA를 얻는 것을 목표로합니다. 이 과정은 후속 분자 분석, 클로닝, 시퀀싱 및 유전자 발현 연구에 중요합니다. 다음으로 몇 가지 일반적인 DNA 정제 방법을 소개합니다.

1. 페놀/클로로포름 방법

원리 : 고 염 농도에서 물에서 DNA 및 클로로포름과의 DNA의 호환성뿐만 아니라 DNA 및 RNA의 불용성 특성에 기초합니다.

2. 단계 :

1> DNA 샘플은 페놀과 혼합된다.

2> 클로로포름을 첨가하고 원심 분리에 의해 DNA를 분리하여 흰색 층으로 나타납니다.

3> 추출 된 DNA를 세척하고 건조시키고 마침내 순수한 물에 첨가하고 재현 탁시킨다.

3. 특징 : 단백질과 다른 불순물을 효과적으로 제거 할 수 있지만, 수술은 비교적 번거롭고 독성 페놀과 클로로포름을 사용해야합니다.

2. 에탄올 또는 이소프로판올 침전 방법

원리 : 에탄올 또는 이소프로판올을 사용하여 유전 상수를 줄이고, 핵산의 친수성을 줄이고 용액으로부터 침전시킨다.

2. 단계 :

1> 용액에 2 가지의 빙냉 에탄올 또는 동일한 부피의 실온 이소프로판올을 추가하십시오.

2> 핵산 침전물을 원심 분리하십시오.

3> 침전물을 차가운 70% 에탄올로 씻어 염을 제거하십시오.

4> 핵산 펠렛을 건조시키고 깨끗한 수성 완충제로 재현 탁합니다.

3. 특징 : 저렴한 비용, 간단한 작동이지만 오랜 시간, 수동 실행이 필요합니다.

3. 실리콘 컬럼 방법

원리 : 실리카 겔 컬럼의 실리카 겔은 DNA에 대해 매우 높은 친화력을 가지며, DNA를 흡수하고 불순물을 제거 할 수 있습니다.

2. 단계 :

1> DNA 샘플을 효소 적으로 처리 하였다.

2> 실리카 겔 컬럼을 통해, DNA는 실리카 겔에 흡착되고, 불순물이 제거된다.

3> 적절한 알코올 침전 방법을 사용하여 실리카 겔 컬럼에서 순수한 DNA를 씻어 내십시오.

3. 특징 : 빠르고 효율적이며 대규모 DNA 정제에 적합합니다.

IV. 소금 기반 방법

원리 : 소금 농도의 변화를 사용하여 높은 염 농도에서 옥살 레이트 침전을 형성 한 다음 에탄올 침전으로 염 농도를 세척하고 감소시켜 마침내 순수한 DNA를 얻습니다.

2. 단계 :

1> 높은 염 용액과 DNA 샘플을 혼합하십시오.

2> DNA 강수량을 촉진하기 위해 소금 농도가 낮은 용액을 추가하십시오.

3> 에탄올 침전 방법으로 세척하고 염의 농도를 줄입니다.

4> 순수한 DNA를 얻기 위해 건조.

3. 특징 : 간단하고 사용하기 쉽지만 소금을 완전히 제거하기 위해 여러 세척이 필요할 수 있습니다.

5. 자기 구슬 방법

원리 : 기능적 자기 비드는 DNA를 인식하고 결합하고 자기장을 통해 자기 비드를 수집하고 불순물을 제거 할 수 있습니다.

2. 단계 :

1> DNA 샘플을 효소 적으로 처리 하였다.

2> 기능화 된 자기 비드를 첨가하고 자기 비드는 DNA에 결합한다.

3> 자기장을 통해 자기 비드를 수집하여 불순물을 제거합니다.

4> 순수한 DNA를 얻기 위해 세척하고 건조시킨다.

3. 기능 : 빠르고 효율적이며 자동으로 작동하기 쉽습니다.

6. 겔 전기 영동 및 스핀 컬럼 정제 방법

원리 : 먼저, 관심 DNA는 아가 로스 겔 전기 영동에 의해 다른 핵산 및 오염 물질로부터 분리 된 다음, 스핀 컬럼 정제 키트를 사용하여 겔에서 DNA를 회수한다.

2. 단계 :

1> 관심있는 DNA 대역을 가로 채기 위해 아가 로스 겔 전기 영동을 수행하십시오.

2> 스핀 컬럼 정제 키트를 사용하여 겔에서 DNA를 정제합니다.

3> 순수한 DNA는 결합, 세척 및 용리 단계를 통해 얻어진다.

3. 특징 : 겔에서 특정 크기의 DNA 단편을 재활용하는 데 적합하지만, 작동은 비교적 복잡하며 오랜 시간이 걸립니다.

DNA 정제를위한 많은 방법이 있으며, 각각의 장점과 단점이 있습니다. 정제 방법을 선택할 때는 실험의 특정 요구와 조건에 따라 포괄적으로 고려해야합니다.