단백질 분리 및 정제 단계

단백질 분리 및 정제의 단계는 복잡한 생물학적 샘플로부터 관심있는 단백질을 추출하고 정제하도록 설계된 복잡하지만 미세한 과정이다. 이 단계에는 일반적으로 샘플 준비, 예비 분리, 미세 분리, 순도 분석 및 정제와 같은 몇 가지 주요 단계가 포함됩니다. 다음으로 각 단계의 목표와 특정 작업 방법에 대해 자세히 설명합니다.

1. 샘플 준비

1. 목적 : 표적 단백질을 함유 한 샘플을 치료하여 불순물을 제거하여 단백질을 용해시키고 안정화시킵니다.

2. 방법 :

1> 세포 분쇄 : 세포 또는 조직은 기계적 분쇄 방법 (예 : 고속 조직 분쇄기, 균질화, 박격포 등), 삼투 분쇄 방법, 반복 동결-해동 방법, 초음파 방법 또는 효소 적 방법 등에 의해 분쇄되어 세포 또는 조직을 파괴하여 단백질을 방출합니다.

2> 원심 분리 및 여과 : 세포 잔해, 불용성 물질과 같은 불순물을 제거하고 비교적 순수한 단백질 용액을 얻습니다.

2. 예비 분리

1. 목적 : 단백질의 물리적 및 화학적 특성에 따라 적절한 분리 방법을 선택하고 처음에는 표적 단백질을 분리합니다.

2. 방법 :

1> 이온 교환 크로마토 그래피 : 단백질의 전하 특성에 따라 분리.

2> 소수성 크로마토 그래피 : 단백질의 소수성에 따라 분리.

3> 친 화성 크로마토 그래피 : 단백질의 특이 적 결합을 분리를 위해 특정 리간드에 사용하십시오.

4> 등전점 침전 방법 : 단백질이 등전 지점에서 가장 낮은 용해도를 갖는 원리를 사용하여 분리된다.

5> 소금 아웃 방법 : 단백질 용액에 다량의 중성 염을 첨가하여 단백질을 침전시킨다.

3. 세분 및 분리

1. 목표 : 초기 분리 된 단백질을 추가로 정제합니다.

2. 방법 :

1> 겔 여과 크로마토 그래피 (분자 배제 크로마토 그래피) : 단백질의 분자 크기에 따라 분리된다.

2> 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC) : 샘플은 고압을 사용하여 고정 상을 통과하고 단백질 친화력에 따라 분리됩니다.

3> 전기 영동 : 전기 력을 사용하여 단백질의 전하 및 분자 크기를 분리하십시오.

4. 순도 분석

1. 객관적인 : 분리 된 및 정제 된 단백질에 대한 순도 분석을 수행하여 순도를 확인하십시오.

2. 방법 :

1> SDS-PAGE 전기 영동 : 단백질의 이동성을 비교하여 순도를 분석합니다.

2> UV 가시 스펙트럼 : 단백질의 흡수 스펙트럼에 기초하여 순도를 분석합니다.

3> 질량 분석법 : 단백질의 분자량이 결정되고 순도가 분석됩니다.

5. 정제

1. 객관적인 : 순도 및 활동을 개선하기 위해 필요에 따라 정제 된 단백질의 농축, 결정화 및 기타 처리.

2. 방법 : 투석, 한외 여과, 동결 건조 및 기타 기술을 포함하여 단백질의 천연 활동 및 안정성을 유지하면서 과도한 소금, 완충액 또는 기타 소분자 불순물을 제거합니다.

단백질 분리 및 정제는 표적 단백질 및 실험 요구의 특성에 기초하여 적절한 분리 및 정제 전략의 선택을 요구하는 다단 단계의 다중 방법 공정이다. 각 단계는 중요하며 목표 단백질의 높은 순도, 높은 활성이 마침내 얻을 수 있도록 신중한 취급과 조건을 엄격하게 제어해야합니다.