단백질 추출 단계

단백질 추출 단계는 샘플 유형의 다양성, 단백질의 독특한 특성 및 실험의 특정 목표에 따라 다릅니다. 다음은보다 일반적인 단백질 추출 단계에 대한 개요이지만 실제 작업의 특정 상황에 따라 조정해야합니다.

1. 준비 단계

1. 추출 목표 및 물질 결정 : 추출 해야하는 단백질의 유형을 명확히하고 적합한 생물학적 샘플 (예 : 세포, 조직, 체액 등)을 선택하십시오.

2. 추출물 및 시약 준비 : 단백질의 특성 및 실험 요구에 따라 적절한 추출물, 완충제, 프로테아제 억제제 등을 준비하십시오.

2. 샘플 처리

1. 샘플 수집 : 세포 샘플의 경우 원심 분리, 여과 등으로 수집 할 수 있습니다. 조직 샘플의 경우 절단, 분쇄 등이 필요합니다.

2. 기타 재료 세척 및 제거 : 사전 냉각 식염수 또는 PBS 및 기타 완충제를 사용하여 혈액, 배양 배지와 같은 불순물을 제거하십시오.

3. 균열 세포 또는 조직

1. 기계적 분쇄 : 균질화 제, 박격포, 고속 조직 매싱 기계 및 기타 장비를 사용하여 세포 나 조직을 파괴하십시오.

2. 물리적 파괴 : 초음파 파괴, 동결-해동 파손 등, 물리적 힘을 통한 세포 나 조직 파손.

3. 화학 분쇄 : 효소 용해, 삼투압 변화 및 기타 방법을 사용하여 세포 또는 조직을 파괴하십시오.

4. 단백질 추출

1. 추출물 추가 : 일반적으로 완충액, 소금 용액, 세제 및 기타 성분을 포함하여 분쇄 된 세포 또는 조직 현탁액에 적절한 양의 추출물을 추가하십시오.

2. 저어주고 배양하십시오 : 현탁액을 부드럽게 저어 추출물에 단백질을 완전히 용해시키고 필요에 따라 배양합니다.

3. 원심 분리 : 불용성 물질, 세포 파편 및 기타 불순물과 같은 불순물을 제거하기위한 현탁액을 원심 분리하십시오. 상청액은 원유 단백질 추출 용액으로서 수집된다.

V. 정제 및 식별

1. 정제 : 필요에 따라, 소금, 겔 크로마토 그래피, 친 화성 크로마토 그래피 및 기타 방법을 사용하여 조상 단백질을 정화 할 수 있습니다.

2. 식별 : 정제 된 단백질은 순도, 분자량, 구조 및 기타 특성을 확인하기 위해 전기 영동, 크로마토 그래피, 질량 분석법 및 기타 방법으로 확인됩니다.

6. 주목할만한 것들

1. 온도를 낮게 유지하십시오 : 전체 추출 과정에서 단백질 변성을 방지하기 위해 최대한 온도를 낮게 유지하십시오.

2. 오염을 피하십시오 : 외인성 물질의 오염을 피하기 위해 실험 장비의 청소 및 멸균 작동에주의하십시오.

3. 적절한 용매 및 조건을 선택하십시오. 단백질의 특성 및 실험 요구에 따라 추출 및 정제를위한 적절한 용매 및 조건을 선택하십시오.

단백질 추출은 의심 할 여지없이 복잡하고 정확한 과정입니다. 각 작동 단계는 상이한 샘플 및 단백질의 끊임없이 변화하는 특성에 대처하기 위해 정확한 제어가 필요하다. 또한 과학 기술의 지속적인 개발로 새로운 단백질 추출 방법과 기술이 계속 등장하여 단백질 연구를위한 더 많은 선택과 가능성을 제공합니다.