NGS 자동 도서관 건설 프로세스

NGS 자동화 라이브러리 건설은 자동화 기술 및 장비를 사용한 DNA 또는 RNA 샘플의 고 처리량, 고효율 및 고정밀 라이브러리 구조 프로세스를 말합니다. 이 프로세스는 샘플 처리, DNA/RNA 추출, 라이브러리 구성, 품질 관리, 수동 작업을 줄이고 실험 효율성과 정확성을 향상시키는 것을 목표로합니다.

1. 샘플 준비 및 DNA/RNA 추출

1. 샘플 수집 : 샘플의 무결성과 대표성을 보장하기 위해 세포, 조직, 혈액 등과 같은 표적 샘플을 수집합니다.

2. 샘플 처리 : DNA 또는 RNA를 방출하기 위해 세포 용해, 조직 분쇄 등과 같은 샘플 유형에 따라 적절한 치료 방법을 선택하십시오.

3. DNA/RNA 추출 : 샘플로부터 고품질 DNA 또는 RNA를 정제하기 위해 적절한 추출 방법 (예 : 페놀 클로로포름 방법, 자기 비드 방법, 컬럼 방법 등)을 사용합니다.

2. 도서관 건설

도서관 건설은 NGS 자동 라이브러리 구조의 핵심 단계이며, 일반적으로 다음과 같은 내용이 포함됩니다.

1. DNA/RNA 단편화 :

1> 후속 시퀀싱 반응을 위해 더 작은 단편으로 DNA 또는 RNA 분자를 절단합니다. 단편화는 물리적 방법 (예 : 초음파 파괴) 또는 화학적 방법에 의해 달성 될 수있다.

2> 단편 크기는 일반적으로 시퀀싱 플랫폼 및 실험 요구 사항에 따라 100-1000베이스 쌍 사이입니다.

2. 수리 및 A- 테일 엔드 :

1> 단편화 된 DNA 또는 RNA의 최종 복구를 수행하여 말단 손상을 제거하고 포스페이트 그룹과 3 인치 말단을 첨가하십시오. 이러한 수리 단계는 후속 결찰 앱 타머 및 라이브러리 증폭을 용이하게합니다.

3. 연결 앱 타머 :

1> 수리 된 DNA 또는 RNA 단편을 특정 aptamer (링커라고도 함)에 연결하십시오. aptamers는 후속 PCR 증폭 및 시퀀싱 반응을위한 특정 서열을 함유하는 DNA 또는 RNA 단편이다.

2> 자동화 된 라이브러리 구성 프로세스 에서이 단계는 일반적으로 자동화 된 피펫 팅 및 연결 반응을 통해 달성됩니다.

4. 라이브러리 증폭 :

1> 시퀀싱에 사용될 수있는 라이브러리를 형성하기 위해 PCR 증폭에 의해 Aptamer에 연결된 DNA 또는 RNA 단편을 충분한 수로 증폭시킨다.

2> aptamer 서열을 갖는 프라이머는 증폭 공정 동안 특정 증폭에 사용된다.

3. 도서관 품질 관리

라이브러리 품질 관리는 라이브러리의 품질과 시퀀싱 결과의 신뢰성을 보장하는 중요한 단계입니다. 일반적인 도서관 품질 관리 방법은 다음과 같습니다.

1. 정량적 PCR : 라이브러리의 농도 및 증폭 효율을 감지하는 데 사용됩니다.

2. 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동 : 라이브러리 조각의 크기 분포를 평가하는 데 사용됩니다.

3. 질량 분석법 분석 : 라이브러리의 품질과 순도를 더욱 검증하는 데 사용됩니다.

4. 기능 :

1. 자동화 된 작동 : 자동 장비를 통해 샘플 처리 및 라이브러리 구조와 같은 단계를 자동화하여 수동 개입을 줄입니다.

2. 효율성 향상 : 자동화 된 공정은 실험주기를 단축시키고 실험 효율을 향상시킵니다.

3. 오류 감소 : 인간 작동으로 인한 오류를 줄이고 실험 결과의 정확성과 안정성을 향상시킵니다.