NGS 라이브러리 건설 워크 스테이션의 운영 프로세스

NGS (차세대 시퀀싱) 라이브러리 빌딩 워크 스테이션의 작동 단계는 일반적으로 다수의 복잡한 분자 생물학 프로세스를 포함하며, 이는 고 처리량 시퀀서에 적합한 라이브러리로 서열화 될 DNA 또는 RNA 샘플을 변환하는 것을 목표로한다. 다음은 일반적인 원칙을 기반으로 NGS 라이브러리 건축 워크 스테이션의 운영 단계에 대한 개요이지만 특정 단계는 라이브러리 건축 방법, 샘플 유형 및 사용 된 장비 및 시약에 따라 다를 수 있습니다. 이 기사의 내용은 참조 용입니다.

NGS 라이브러리 빌딩 워크 스테이션을위한 운영 단계 개요

1. 샘플 준비

1> 샘플을 얻으십시오 : 유기체 (예 : 세포, 조직, 혈액 등)에서 DNA 또는 RNA를 추출하십시오.

2> 품질 관리 : 라이브러리 구성 요구 사항이 충족되도록 샘플의 품질과 양을 평가하십시오.

2. 핵산 조각화

1> DNA 단편화 : DNA 라이브러리 구축의 경우, 물리적 방법 (초음파, 효소 절단)은 일반적으로 특정 길이의 작은 조각 (예 : 200-500bp)으로 DNA를이기는 데 사용됩니다.

2> RNA 단편화 : RNA 라이브러리 건물, 특히 mRNA 라이브러리 건물의 경우 먼저 mRNA 정제가 필요하며, 그 후 단편화가 수행됩니다 (예 : 금속 이온 사용, 효소 처리 등).

3. 수리 및 테일링 종료

1> DNA 말기 복구 : 엔드 복구 효소를 사용하여 5'- 말단 인산화 및 3'- 말단 A 단편화 된 DNA에 대한 치료를 수행하여 후속 링커 결찰을 촉진합니다.

2> RNA 역전사 : RNA 라이브러리 빌딩의 경우, 조각난 RNA는 cDNA로 역 전환 된 다음 DNA- 유사 말단 복구 및 테일링 처리가 수행됩니다.

4. 커넥터 연결

1> 링커 설계 : 시퀀싱 플랫폼의 요구 사항에 따라 적절한 링커 시퀀스를 설계합니다.

2> 링커 결찰 : DNA 리가 제를 사용하여 링커를 처리 된 DNA 또는 cDNA 단편의 양쪽 끝에 연결합니다.

5. 라이브러리 증폭

1> PCR 증폭 : 링커에 연결된 DNA 또는 cDNA 단편은 PCR 반응에 의해 증폭되어 라이브러리에서 표적 서열의 농도를 증가시킨다.

2> 품질 관리 : 품질 관리는 증폭 된 라이브러리에서 수행되며 그 농도, 순도 및 단편 크기 분포가 평가됩니다.

6. 라이브러리 정화

1> 자기 구슬 정제 : 라이브러리에서 불순물 (예 : 프라이머, 소금 이온 등)을 제거하기 위해 자기 구슬 및 기타 방법을 사용하여 라이브러리의 순도를 향상시킵니다.

2> 정량적 검출 : QPCR 및 기타 방법을 사용하여 정제 된 라이브러리의 정량적 검출을 수행하여 후속 시퀀싱 동안 샘플 할당을 용이하게합니다.

7. 도서관 품질 검사 및 스토리지

1> 품질 검사 : 시퀀싱 요구 사항을 충족하도록 최종 라이브러리의 품질 검사를 수행하십시오.

2> 스토리지 : 후속 시퀀싱을 위해 적절한 조건 (예 : -20 ° C 또는 -80 ° C)에 자격을 갖춘 라이브러리를 저장하십시오.

8. 주목할만한 것들

1> 전체 라이브러리 구성 과정에서 실험 결과의 정확성과 반복성을 보장하기 위해 실험 조건 (예 : 온도, 시간, 효소 수량 등)을 엄격하게 제어해야합니다.

2> 다양한 라이브러리 건설 방법의 운영 단계 (예 : 기존 라이브러리 구성, 트랜스 포지 라이브러리 건설, Amplicon Library Construction 등)는 다릅니다. 적절한 라이브러리 구성 방법은 실험 요구에 따라 선택해야합니다.

3> NGS 라이브러리 건설 워크 스테이션을 사용할 때 장비 지침 및 시약 운영 지침을 신중하게 읽고 실험실의 안전 운영 절차를 따라야합니다.

위의 작동 절차에서 NGS 라이브러리 건설 워크 스테이션의 특정 작동 단계는 장비 모델, 시약 유형 및 사용 된 실험 설계에 크게 의존하고 있음을 알 수 있습니다. 따라서 장비 공급 업체의 전문 의견을 참조하거나 실제 구현 전에 최신 과학 문헌을 널리 검토하여 상세하고 정확한 운영 지침을 얻는 것이 중요합니다. 이러한 사전 작업은 실험 프로세스의 원활한 진행을 보장하고 실험 결과의 정확성과 신뢰성을 최대화 할 수 있습니다.