RNA를 추출하는 단계

생물학적 과학의 방대한 탐구에서 RNA 추출은 의심 할 여지없이 삶의 신비를 잠금 해제하는 데 중요한 단계이며, 모든 링크에는 신중한 계획과 실행이 필요합니다. 세포, 조직 또는 기타 생물학적 샘플로부터 귀중한 RNA 분자를 효율적이고 순전히 분리하려면 다음 일련의 엄격하고 세심한 작동 절차를 따라야합니다.

1. 실험 준비

1. 시약 및 장비 준비 : 원심 분리기, 피펫, 세포 스크레이퍼, 박격포, 액체 질소, RNA 보호기, 트리졸 시약, 클로로포름, 이소프로판 놀, 75% 에탄올, RNase-free water 또는 완충제 등과 같은 실험에 필요한 모든 시약 및 장비를 준비하십시오.

2. 안전 보호 : 실험의 안전을 보장하기 위해 실험 의류 및 보호 안경과 같은 필요한 보호 조치를 착용하십시오.

3. 실험 단계를 읽으십시오 : 실험 단계를주의 깊게 읽고 기록 책을 준비하여 실험 프로세스 및 결과를 기록하십시오.

2. 샘플 수집 및 처리

1. 샘플 선택 : 세포, 조직, 혈청, 소변 등과 같은 실험 요구 사항에 따라 적절한 샘플을 선택하십시오. 샘플이 대표적이며 RNA 프로테이터를 즉시 추가하여 RNA 분해를 방지하십시오.

2. 샘플 저장 : RNA 완전성을 유지하기 위해 저온 조건 (예 : 액체 질소 또는 -80 ° C 냉장고)에서 수집 된 샘플을 저장합니다.

3. 세포 분해

1. 기계적 분쇄 : 고속 원심 분리기, 초음파 또는 액체 질소 동결과 같은 기계적 방법을 사용하여 세포를 파괴하십시오. 조직 샘플의 경우, 샘플은 사전 냉각 된 모르타르를 사용하여 분말로 분쇄 될 수 있습니다.

2. 화학적 분해 : 세포 또는 조직 샘플에 적절한 양의 세포 용 해물 (예 : 트리졸 시약)을 추가하고, 세포가 완전히 용해 될 때까지 세포 주걱으로 샘플을 반복적으로 피펫 팅합니다.

4. RNA 추출

1. 층 : 동일한 부피의 클로로포름을 세포 용 해물에 첨가하고 철저히 섞은 다음 원심 분리합니다. 원심 분리 후, 샘플은 3 개의 층으로 분할 될 것이다 : 상부 층은 무색 수성 상 (주로 RNA를 함유 함), 중간 층은 DNA를 함유하는 층이고, 하부 층은 유기 층이다.

2. 수성 상을 옮깁니다. 중간 층 및 유기 층의 흡입을 피하기 위해 상부 수성 상을 새로운 원심 분리 튜브로 조심스럽게 옮깁니다.

3. 침전물 RNA : 동일한 부피의 이소프로판올을 수성 상에 첨가하고 철저히 혼합 한 다음 원심 분리하여 원심 분리 튜브의 바닥에 RNA를 침전시킨다.

4. RNA 세척 : 상청액을 조심스럽게 붓고 75% 에탄올로 RNA 침전물을 세척하여 이소프로판올 및 기타 불순물을 제거합니다.

5. 건조 RNA : 통풍이 잘되는 장소에서 원심 분리기를 말리거나 잔류 에탄올을 흡수성 종이로 빨아 먹는다. 녹기가 어렵지 않도록 RNA를 완전히 건조시키지 않도록주의하십시오.

V. RNA 용해

1. RNA를 용해시켜 : 원심 분리 튜브에 적절한 양의 RNase-free 물 또는 완충액을 추가하고, RNA 침전을 용해시키기 위해 부드럽게 흡인하고 비트.

2. 가열 및 용해 : 원심 분리 튜브를 70 ° C 수조에 넣고 잠시 동안 가열하여 RNA를 완전히 용해시킵니다.

6. RNA 정량화 및 보존

1. RNA 정량화 : 자외선 흡수 분광법 또는 형광 분석기를 사용하여 RNA의 농도 및 순도를 결정합니다.

2. RNA 보존 : -80 ° C의 저온 조건에서 RNA를 저장하거나 RNA 분해 및 오염을 피하기 위해 RNase 억제제 및 기타 물질을 첨가하십시오.

7. 주목할만한 것들

1. RNase 오염 방지 : RNase (RNase)는 환경에 널리 존재하며 RNA를 저하시킬 수 있습니다. 따라서 RNA를 추출하는 전체 과정에서 RNase가없는 플라스틱 제품 및 유리 제품을 사용해야하며 RNase 오염을 방지하기 위해 새로운 장갑을 자주 교체해야합니다.

2. 실험 조건 : RNA는 알칼리성 조건 하에서 분해되기 쉽기 때문에, RNA 추출은 7 미만의 pH를 갖는 조건 하에서 수행되어야한다. 동시에, RNA 분해를 방지하기 위해 실험 동안 저온 조건을 유지하는 데주의를 기울여야한다.

3. 수술 세부 사항에주의를 기울이십시오 : 수성 상을 전달하는 단계, RNA를 촉진하고 RNA를 세척하는 단계에서 RNA의 손실을 피하거나 불순물을 도입하기 위해 신중한 작동이 수행되어야합니다.

이 기사는 RNA 추출 프로세스의 기본 작동 만 제공합니다. 특정 실험 요구를 충족시키는보다 전문적이고 효율적이며 RNA 추출을 위해 실험 운영자는 권위있는 전문 서적, 최신 연구 논문 또는 공식 기술 자료를 언급하는 것이 좋습니다. 다른 실험의 특정 목표는 시약 사용량, 추출 온도의 양이 다른 조정으로 직접적으로 이어질 것이기 때문에 특정 단계가 확장 또는 단축 될 시간입니다.