应用笔记 | 在 Opentrons Flex 上自动化的 Bicinchoninic Acid (BCA) 检测法

实验方法

实验结果

在  Opentrons  Flex  上运行的优化方案包含以下步骤：首先精准执行标准品、质控品及实验样品的稀释与转移 至 96 孔板的操作；随后自动添加 BCA 试剂，并启动在 37°C 下为期 30 分钟的孵育过程（依托 Opentrons 热振荡模 块），以优化显色反应；最终，由集成于 Flex 的板式吸光度读板器在 562 nm 下自动完成吸光度检测。

图 1. 总蛋白定量中 BCA 检测、吸光度测量和数据处理的工作流程（上图）。在 Opentrons Flex 上进行全自动 BCA 检测的甲板布局（下图）。

A3: Opentrons Flex 板式吸光度读板器

B2: 96 孔板盖

B3: 96 深孔板，内含样品（第 1-4 列）

C1: Opentrons Flex 吸头架, 200 µL

C2: 2 mL 方形 V 底 96 深孔板，内含：

• 每孔 1.5 mL BCA 试剂（第 1 列）

• 每孔 0.9 mL BCA 试剂（第 2 列）

• 450-600 uL BSA 标准品 (2 mg/mL; A5 孔)

• 每孔 250 µL 裂解缓冲液 (B10 -> H10)

• 每孔 1 mL 裂解缓冲液 (A11 -> H12)

C3: 96 孔 BCA 检测板

D1: Opentrons 热振荡模块

最后，本研究对由蛋白标准品制备的八个校准品样品进行了评估，并用于绘制标准曲线（图 2）。每个校准品和质 控品样品的吸光度测量值在六次独立运行中高度吻合，并且在集成的 Opentrons Flex 板式吸光度读数器与第三方酶标仪的直接比较中也表现一致（图 3）。

图 2. 从蛋白标准品制备了八个不同浓度的校准品（左）。进行了六次独立运行（标记为 Exp 1-6），设置双复孔，使用 BS标准方案来绘制标准曲线（右）。

图  3.  对由蛋白标准品制备的八个校准品（左）和三个质控样品（右）（双复孔，3个水平；每个水平2个重复：   QCH-1000  µg/mL,  QCM-500 µg/mL,  QCL-250  µg/mL）的吸光度测量值在六次独立运行之间进行了比较。吸光度测量在 562  nm  波长下使用第三方酶标仪（蓝色）或集成的 Flex 板式吸光度读板器（黑色）进行，显示出一致的线性和信号检测性能。

对大鼠器官组织裂解液（来自大脑、心脏、肝脏和脾脏）进行了总蛋白定量，以比较手动和自动化  BCA  检测方案。在 Opentrons Flex 上进行的全自动 BCA 检测计算出的样品浓度 (µg/mL) 与使用手动 BCA 方案测量的浓度在四种器官类型和每种组织的六个样品中均保持一致（图 4）。

图 4. 对四种大鼠组织器官类型（大脑、心脏、肝脏和脾脏）的六个组织样品完成了总蛋白定量。测量总蛋白浓度 (µg/mL) 以比较手动 BCA 检测方案与自动化方案。误差线 (B) 显示了总体均值的 95% 置信区间。